小标本和细胞学标本的基因检测内容介绍•小标本和细胞学标本的获取•标本的病理学评估•检测方法的选择•EGFR 突变检测应用小标本和细胞学标本的获取内科多手段获取肺癌标本无创• 痰脱落细胞• 细针活检• 支气管镜：TBLB ，TBNA ， EBUS-TBNA• CT 引导活检术有创• 纵隔镜• 胸腔镜病理诊断+ 基因检测支气管镜活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的检测方法细针穿刺活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的检测方法细胞学标本•细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少，需要采用灵敏度高的检测方法•利用染色后的细胞涂片直接刮片，提取DNA ，用于基因检测•制备细胞蜡块：–处理流程：细胞学标本经离心处理后，常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋–制备细胞蜡块的好处： （1 ）便于长期保存；（2 ）方便用于EGFR 基因突变的检测及其他分子生物学标记物的检测胸水或支气管刷片涂片、染色病理诊断液基细胞学病理诊断细胞蜡块，切片染色病理诊断•病理组织学诊断：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌•肿瘤量：确保有足够的肿瘤组织用于突变检测尽量保证200-400 个肿瘤细胞可以尝试进行<200 个肿瘤细胞的标本检测5uM 10 张切片能满足突变检测需求当细胞数较少时, 可以适当增加切片数•肿瘤比例：一般要求肿瘤比例>20% ，否则，需要标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例尽量去除非肿瘤组织及细胞，提高检测的敏感性不同敏感性的检测方法对肿瘤比例要求不一样标本的病理评估小标本和细胞学标本的EGFR 突变检测肿瘤组织的异质性遗传异质性正常细胞混杂检测方法的比较ME-PCR/ SequencingO= Transfer product /add reagent/ open tubePCR: Real-timeDetectionPCRClean-upSequencing RxnCapillary SequencingPCRPCRClean-upSequencing RxnCapillarySequencing PCRHetero-duplexCapillaryElectro-phoresisARMS & PNA-LNA clampPCR/ SequencingNested PCR/ SequencingPCR/HRMA/dHPLC PCR/RFLPPCRRFLPElectro-phoresisSizing PCRPCRClean-upSequencing RxnCapillarySequencing RFLPOOOOOOOOOOOOTaqMan Clean-upOClean-upOClean-upOOOOPCRSURVEYORcleavagedHPLCSizing OConfirmation by sequencing PCR/SURVEYORPCRClean-upPyro-sequencing RxnPyro SequencingOO123456Steps7Confirmation by sequencing OConfirmation by sequ...
